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列舉一下中國(guó)藥典中規(guī)定的集菌儀具體操作方法

返回列表 瀏覽:119 日期:2025-06-06

《中國(guó)藥典》(現(xiàn)行版本為 2025 年版)中未對(duì)集菌儀的具體操作步驟進(jìn)行詳細(xì)圖文描述,但在 通則 1101 無(wú)菌檢查法 和 通則 1121 微生物限度檢查法 中,明確規(guī)定了集菌儀在 薄膜過(guò)濾法 中的應(yīng)用原則和技術(shù)要求。以下是基于藥典通則內(nèi)容提煉的操作規(guī)范及關(guān)鍵要點(diǎn): 

一、適用范圍 

集菌儀主要用于藥品、生物制品等的 無(wú)菌檢查(確認(rèn)樣品是否含活菌)和 微生物限度檢查(測(cè)定樣品中微生物數(shù)量及控制菌),通過(guò) 薄膜過(guò)濾法 實(shí)現(xiàn)以下操作: 樣品過(guò)濾:截留微生物于濾膜表面,排除樣品抑菌成分或富集低濃度微生物。 沖洗與中和:用沖洗液或中和劑消除樣品干擾,確保后續(xù)培養(yǎng)準(zhǔn)確性。 接種培養(yǎng):將濾膜轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)基中,觀察是否有菌生長(zhǎng)。 

二、核心操作流程(基于藥典通則) 

1.設(shè)備與耗材準(zhǔn)備 集菌儀要求: 具備 蠕動(dòng)泵 驅(qū)動(dòng)管路,可調(diào)節(jié)流速(通常 0.1~100mL/min),并能保持恒定壓力。 配套 無(wú)菌集菌培養(yǎng)器(含濾膜,孔徑一般為 0.45μm,用于微生物限度檢查;0.22μm 用于無(wú)菌檢查)。 滅菌要求: 集菌培養(yǎng)器、濾膜、管路等耗材需經(jīng) 濕熱滅菌(121℃,30 分鐘)或 無(wú)菌采購(gòu)(一次性無(wú)菌產(chǎn)品)。 操作需在 無(wú)菌環(huán)境 下進(jìn)行(如潔凈工作臺(tái)或無(wú)菌隔離系統(tǒng))。

2. 樣品過(guò)濾 樣品制備: 按藥典要求制備供試液(如溶解、稀釋樣品),若樣品含防腐劑或抑菌成分,需先 中和(如加入中和劑、滅活酶或采用薄膜沖洗法)。 過(guò)濾操作: 將集菌培養(yǎng)器安裝至集菌儀,連接樣品瓶與蠕動(dòng)泵管路。 啟動(dòng)蠕動(dòng)泵,將供試液通過(guò)濾膜過(guò)濾(流速以不堵塞濾膜為宜,通常 5~20mL/min)。 若樣品黏稠或含顆粒,需先 預(yù)過(guò)濾(用相同孔徑濾膜或離心處理),避免濾膜堵塞。 

3. 濾膜沖洗與中和(關(guān)鍵步驟) 沖洗目的:去除樣品殘留的抑菌成分,同時(shí)避免微生物被過(guò)度沖洗損失。 沖洗液選擇: 常用 pH7.0 氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液、無(wú)菌水 或 含 0.1% 聚山梨酯 80 的緩沖液(針對(duì)油脂類樣品)。 若樣品含抗生素,需加入 中和劑(如青霉素酶中和青霉素類藥物)。 沖洗量: 無(wú)菌檢查:每膜沖洗量 ≤1000mL(藥典通則 1101),分次沖洗,每次不宜超過(guò) 200mL。 微生物限度檢查:每膜沖洗量 100~200mL(藥典通則 1121),可分 2~3 次完成。 

4. 接種與培養(yǎng) 無(wú)菌檢查: 過(guò)濾完畢后,用無(wú)菌剪刀剪下濾膜(若為封閉式集菌器,可直接開啟培養(yǎng)端口)。 將濾膜 等分剪開,分別轉(zhuǎn)移至 硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基(培養(yǎng)需氧菌 / 厭氧菌)和 胰酪大豆胨培養(yǎng)基(培養(yǎng)真菌)中。 培養(yǎng)基用量需覆蓋濾膜,培養(yǎng)溫度與時(shí)間按藥典規(guī)定(如需氧菌 30~35℃培養(yǎng) 14 天,真菌 20~25℃培養(yǎng) 14 天)。 微生物限度檢查: 過(guò)濾后,直接將濾膜貼于 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(菌落總數(shù))、玫瑰紅鈉培養(yǎng)基(霉菌酵母)或特定選擇性培養(yǎng)基(控制菌)表面。 倒置培養(yǎng),溫度與時(shí)間按標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行(如菌落總數(shù) 36±1℃培養(yǎng) 48 小時(shí))。 

5. 結(jié)果觀察與判斷 無(wú)菌檢查: 若培養(yǎng)基澄清,或雖渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng),判為 符合規(guī)定;若渾濁且確證有菌生長(zhǎng),判為 不符合規(guī)定。 微生物限度檢查: 計(jì)數(shù)濾膜上的菌落數(shù),換算成每單位樣品中的微生物數(shù)量,與藥典標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比(如口服固體制劑菌落總數(shù)≤100CFU/g)。 

三、藥典關(guān)鍵技術(shù)要求 

濾膜適用性: 濾膜需通過(guò) 無(wú)菌檢查 和 孔徑驗(yàn)證(如氣泡點(diǎn)測(cè)試),確保無(wú)外源污染且截留能力符合要求。 陰性與陽(yáng)性對(duì)照: 每次檢驗(yàn)需做 陰性對(duì)照(取同體積沖洗液過(guò)濾培養(yǎng),應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng))和 陽(yáng)性對(duì)照(接種已知菌驗(yàn)證培養(yǎng)基靈敏度)。 抑菌成分處理: 若樣品有抑菌性,需通過(guò) 中和試驗(yàn) 確定沖洗量或中和劑用量(藥典通則 1121 附錄 Ⅵ)。 環(huán)境控制: 操作需在 萬(wàn)級(jí)背景下的局部百級(jí)潔凈區(qū) 進(jìn)行(無(wú)菌檢查),或 不低于 D 級(jí)潔凈環(huán)境(微生物限度檢查)。 四、注意事項(xiàng)(藥典隱含要求) 防止交叉污染: 每檢一個(gè)樣品需更換管路和濾器,若連續(xù)檢測(cè)同類型樣品,需用 75% 酒精消毒管路接口 后再更換。 設(shè)備清潔驗(yàn)證: 清潔后需進(jìn)行 微生物殘留驗(yàn)證(如擦拭法檢測(cè)設(shè)備表面菌落數(shù)),確保無(wú) previous sample carryover。 記錄要求: 需記錄過(guò)濾體積、沖洗量、培養(yǎng)條件、菌落數(shù)等原始數(shù)據(jù),符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》(GMP)追溯要求。 

五、藥典原文引用索引 

無(wú)菌檢查法: 《中國(guó)藥典》2025 年版 通則 1101《無(wú)菌檢查法》 通則 1121《非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查:微生物計(jì)數(shù)法》 薄膜過(guò)濾法操作細(xì)節(jié): 附錄 ⅩⅢ C《藥品微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理指導(dǎo)原則》中 “薄膜過(guò)濾法” 章節(jié)。 如需更詳細(xì)操作,建議結(jié)合那艾儀器集菌儀提供的 驗(yàn)證方案(需通過(guò)藥典適用性測(cè)試)和實(shí)驗(yàn)室 SOP,確保操作符合法規(guī)要求。

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